Coloração de GRAM
É uma técnica de coloração que permite separar as bactérias em gram-positivas ou gram-negativas, foi desenvolvida pelo médico dinamarquês Hans Christian Joachim Gram em 1884.
Essa técnica é útil para direcionar qual o método de tratamento ou antibiótico que será utilizado para combater a infecção, já que as bactérias gram-positivas e gram-negativas se diferenciam pela composição de sua parede celular.
Materiais necessários
- Cristal violeta - Corante, cora a parede bacteriana em azul/roxo.
- Lugol - Fixador, fixa o cristal violeta a parede bacteriana.
- Álcool 95% - Descorante, remove a membrana externa de bactérias gram-negativas.
- Fucsina - Corante, cora a parede bacteriana em vermelho/rosa.
Metodologia
- Colocar o cristal violeta cobrindo a lâmina por 1 min (60 segundos).
- Lavar a lâmina com água corrente (pouco fluxo).
- Colocar o lugol cobrindo a lâmina por 1 min (60 segundos).
- Lavar a lâmina com água corrente (pouco fluxo).
- Pipetar o álcool 95% na lâmina deixando escorrer por três vezes.
- Lavar a lâmina com água corrente (pouco fluxo).
- Colocar fucsina cobrindo a lâmina por 30 segundos.
- Lavar a lâmina com água corrente (pouco fluxo).
- Deixar a lâmina secando.
Diferenciação das paredes
Bactérias gram-positivas possuem em sua parede celular uma camada espessa de peptidoglicanos, já as bactérias gram-negativas possuem uma membrana externa, um espaço periplasmático e depois uma camada mais fina de peptidoglicanos.
Nas bactérias gram-positivas o cristal violeta cora a camada de peptidoglicanos e o lugol faz a fixação dando assim a coloração azul/roxa. Nas bactérias gram-negativas o cristal violeta e o lugol ficam na camada externa da bactéria, o álcool 95% faz a remoção dessa camada externa e a fuscina cora a camada interna de peptidoglicanos dando assim a coloração vermelha/rosa.
